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羽衣甘蓝类受体激酶FERONIA基因克隆、表达及与相互作用蛋白分析
植物研究
2024, 44 (2):
298-306.
DOI: 10.7525/j.issn.1673-5102.2024.02.015
FERONIA（FER）受体激酶在有性生殖中的花粉与柱头信号识别中发挥重要作用，为分析类受体激酶FERONIA（FER）在羽衣甘蓝（Brassica oleracea var. acephala）授粉中的作用，以羽衣甘蓝自交不亲和系（S13-bS13-b ）为研究材料，采用RT-PCR从柱头中克隆得到BoFER基因，获得的BoFER cDNA序列，全长2 682 bp编码893个氨基酸，其含有高度保守激酶结构域和Ser/Thr激酶结合位点。利用qRT-PCR技术对BoFER在授粉过程中的表达水平进行分析，结果发现BoFER在不亲和授粉过程其表达量逐渐升高，而在亲和授粉过程中其表达量逐渐降低。利用酵母双杂交分析BoFER与已知的自交不亲和相关蛋白的相互作用，结果显示BoFER与S位点受体激酶BoSRK13-b的激酶域存在相互作用。  View image in article
图7
BoFER与BoSRK相互作用分析
正文中引用本图/表的段落
利用酵母双杂交分析FER激酶结构域（BoFER-KD）与十字花科植物中自交不亲和相关因子的相互作用，构建酵母表达载体pGADT7-BoFER-KD与pGBKT7-SRK13-b-KD、pGBKT7-MLPK及pGBKT7-ARC1。将被检测质粒组合pGADT7-BoFER-KD与pGBKT7-SRK13-b-KD、pGBKT7-MLPK及pGBKT7-ARC1分别共转化至Y2HGold酵母感受态细胞中，通过SD/-Trp-Leu和SD/-Trp-Leu-His+x-α-gal+3mM 3-AT缺陷型培养基平板中菌落生长状态，鉴定目的蛋白间相互作用情况。结果发现在SD/-Trp-Leu二缺平板上，阳性对照、阴性对照以及共转化酵母生长良好，在SD/-Trp-Leu-His+x-α- gal+3mM 3-AT缺陷型培养基平板中，阳性对照生长且变蓝，阴性对照没有生长，pGADT7-BoFER-KD与pGBKT7-SRK13-b-KD的组合生长且变蓝，pGADT7-BoFER-KD与pGBKT7-MLPK和pGBKT7-ARC1的组合没有生长（见图7）。这些结果表明，BoFER-KD与BoSRK13-b-KD存在相互作用，BoFER-KD与BoMLPK、BoARC1不存在相互作用。
本文的其它图/表
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