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羽衣甘蓝类受体激酶FERONIA基因克隆、表达及与相互作用蛋白分析
植物研究
2024, 44 (2):
298-306.
DOI: 10.7525/j.issn.1673-5102.2024.02.015
FERONIA（FER）受体激酶在有性生殖中的花粉与柱头信号识别中发挥重要作用，为分析类受体激酶FERONIA（FER）在羽衣甘蓝（Brassica oleracea var. acephala）授粉中的作用，以羽衣甘蓝自交不亲和系（S13-bS13-b ）为研究材料，采用RT-PCR从柱头中克隆得到BoFER基因，获得的BoFER cDNA序列，全长2 682 bp编码893个氨基酸，其含有高度保守激酶结构域和Ser/Thr激酶结合位点。利用qRT-PCR技术对BoFER在授粉过程中的表达水平进行分析，结果发现BoFER在不亲和授粉过程其表达量逐渐升高，而在亲和授粉过程中其表达量逐渐降低。利用酵母双杂交分析BoFER与已知的自交不亲和相关蛋白的相互作用，结果显示BoFER与S位点受体激酶BoSRK13-b的激酶域存在相互作用。
表2
BoFER 酵母共转化质粒组合
正文中引用本图/表的段落
将BoFER-KD的序列构建到pGADT7（激活域，AD）表达载体上（见表1）。将BoSRK13-b-KD、Bo-MLPK及Bo-ARC1的ORF序列构建到pGBKT7（DNA结合域，BD）表达载体上，根据酵母转化手册将重组的AD和BD质粒共转化到酵母菌株Y2HGold中，共转化质粒组合（见表2）。将酵母转化子涂布到SD/-Leu-Trp缺陷型平板上进行培养2~3 d。挑取单个酵母菌落加入到含5 mL SD/-Leu-Trp缺陷型液体培养基中，220 r·min-1培养1 d后，取5 μL培养液滴加在SD/-Leu-Trp和SD/-Leu-Trp-His+x-α-gal缺陷型平板上进行培养。利用含有3-氨基-1，2，4-三唑（3-AT）的SD/-Leu-Trp-His缺陷型平板对自激活试验进行验证。
本文的其它图/表
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