小黑杨Rubisco小亚基基因启动子的克隆及表达活性分析 植物研究    2024, 44 (4): 625-633.   DOI: 10.7525/j.issn.1673-5102.2024.04.014

图3 小黑杨Rubisco小亚基基因PxrbcS1、PxrbcS2启动子的克隆
M.DL15000 Marker；1.PxrbcS1启动子PCR产物；2.PxrbcS2启动子PCR产物。

正文中引用本图/表的段落

测定转基因植株的GUS基因表达量，使用CTAB法分别提取转基因84K杨根、茎、叶总RNA，反转录成cDNA，以其为模板，以PxUBQ7作为内参基因，利用附表1中的引物进行RT-qPCR，采用2-ΔΔCT法分析定量数据，并使用Excel 2010、SPSS 8.5和GraphPad Prism 8软件进行柱形图绘制和差异显著性分析。以上试验均设置3个生物学重复。

通过上述基因表达分析，利用特异性引物（附表1）通过PCR的方式从小黑杨叶片DNA中扩增出长度为2 240、2 174 bp的片段（见图3），目的片段胶回收后连接Zero TOPO-Blunt载体，转化大肠杆菌DH5α感受态。各随机选取4个单克隆菌落进行PCR检测，菌液送哈尔滨市生工生物工程公司测序，结果表明插入的片段未发生碱基突变，成功克隆得到小黑杨PxrbcS1、PxrbcS2启动子（序列见本刊网站电子附件）。

本文的其它图/表

• 表1 小黑杨 PxrbcS1 、 PxrbcS2 启动子顺式作用元件分析
  
• 图1 Rubisco小亚基基因在小黑杨叶中的表达
  不同小写字母表示Rubisco小亚基不同基因表达量的差异显著 （P<0.05）。
  
• 图2 小黑杨PxrbcS1、PxrbcS2启动子顺式作用元件
  
• 图4 PCR鉴定植物表达载体pBI121-pPxrbcS1：：GUS和pBI121-pPxrbcS2：：GUS
  M.DL2000 Marker；1.pBI121-pPxrbcS1：：GUS PCR产物；2.pBI121-pPxrbcS2：：GUS PCR产物。
  
• 图5 重组载体pBI121-GUS-Promoter
  
• 图6 转基因84K杨的PCR鉴定
  A：M为DL2000 Marker；1~4.PxrbcS1启动子84K杨转基因株系；5.野生型；6.阳性对照（pBI121-pPxrbcS1：：GUS质粒）。B：M为DL2000 Marker；1~7.PxrbcS2启动子84K杨转基因株系；8.野生型；9.阳性对照（pBI121-pPxrbcS2：：GUS质粒）。
  
• 图7 PxrbcS1、PxrbcS2启动子在84K杨中的GUS表达模式
  
• 图8 小黑杨PxrbcS1（A）、PxrbcS2（B）启动子在转基因84K杨根、茎和叶中GUS基因的相对表达量
  不同小写字母代表不同植物器官GUS基因含量的差异显著（P<0.05）。