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热带亚热带植物学报 ›› 2024, Vol. 32 ›› Issue (02): 257-263.

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基于Tail-PCR分析AN2基因上游启动子活性

宗渊, 韦国, 石光禹, 刘宝龙, 包雪梅   

  1. 中国科学院青海省作物分子育种重点实验室
    中国科学院华南植物园,广东省应用植物学重点实验室,中国科学院华南农业植物分子分析与遗传改良重点实验室
    青海师范大学教育学院
  • 发布日期:2024-10-16
  • 基金资助:
    青海省基础研究计划(2021-ZJ-955Q)资助

  • Published:2024-10-16

摘要: 黑果枸杞(Lycium ruthenicum)富含花青素,AN2基因是调控黑果枸杞花青素合成代谢的主效基因。为解析AN2基因启动子的活性差异,采用Tail-PCR方法分别克隆了黑果枸杞和红果枸杞(L. barbarum) AN2基因起始密码子上游约1 686 bp(LrAN2p)和1 495 bp (LbAN2p)的序列。PlantCARE预测表明,LbAN2p和LrAN2p中分别有133和137个的顺式作用元件,其中,参与光调控的顺式元件分别有11和15个;参与激素响应相关的顺式元件分别有13和16个。构建AN2启动子植物表达载体pKGWFS7:LbAN2p和pKGWFS7:Lr AN2p,利用农杆菌介导的烟草遗传转化体系获得转基因烟草。GUS染色结果表明,LrAN2p能够驱动GUS在烟草中的表达,叶片呈现蓝色,具有较LbAN2p更强的启动活性,qRT-PCR结果表明,LrAN2p转基因烟草中GUS基因具有更高的转录水平,这可能会使AN2基因在黑果枸杞中具有更高的表达,激活黑果枸杞花青素合成代谢通路。这为解析枸杞果色形成及AN2基因的表达调控机制奠定了理论基础。

关键词: 黑果枸杞, 花青素, AN2, 启动子, GUS染色

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